Hashtag: Cosas que quieres saber sobre el endcapping
¿Qué es el endcapping?
Cuando la fase estacionaria a base de sílice se enlaza con grupos funcionales, es imposible alcanzar todos los grupos silanol debido al impedimento estérico y otros factores. Los grupos silanol restantes se denominan grupos silanol residuales y suelen causar colas de pico en compuestos básicos, por lo que deben sililarse. Este proceso de sililación se denomina desactivación de extremos y tiene como objetivo reducir la actividad del silanol.
¿Qué es el doble recubrimiento?
El doble encapsulado significa que se encapsula dos veces. Al aplicar un encapsulado doble (o triple), se minimizan aún más las interacciones de silanol y se mejora la estabilidad a pH medio. Es difícil eliminar todos los grupos silanol residuales, incluso con encapsulado. No es un proceso 100% seguro, y siempre queda una pequeña cantidad de silanoles en la superficie. Sin embargo, a menudo no son reactivos debido al impedimento estérico del agente de encapsulado y los grupos funcionales. Muchos fabricantes optan por aplicar encapsulados múltiples para minimizar al máximo la actividad del silanol.
¿Por qué las columnas HPLC de fase inversa tienen un recubrimiento final?
La desactivación terminal se utiliza con mayor frecuencia en columnas de HPLC de fase reversa. La desactivación terminal de la columna de HPLC minimiza la interacción del silanol al reducir el grupo silanol residual. Protege el soporte de sílice de la disolución y también reduce la adsorción no deseada de compuestos básicos o iónicos. Existen diferentes procedimientos de desactivación terminal en las fases de las columnas de HPLC modernas. La siguiente tabla muestra la diferencia entre la reacción tradicional de enlace de fase estacionaria y la desactivación terminal con TMS:
¿Cuál es la diferencia entre las columnas HPLC de fase inversa normales y las columnas HPLC con protección terminal?
En la fabricación de columnas de fase reversa, es común usar sílice para reaccionar con un silano que contiene una cadena lateral de alcano. Si el alcano es demasiado grande, puede impedirse su reacción con algunos de los grupos silanol en la superficie de la sílice. Estos materiales se denominan no desactivados. El silanol que no reacciona puede reaccionar posteriormente mediante desactivación con un silano que contenga un pequeño grupo alquilo. Estos productos se denominan desactivados.
Se han desarrollado algunas aplicaciones con materiales sin desoxidación, y estos deben utilizarse para reproducir dichos resultados. En el caso de materiales con desoxidación, los especialistas en marketing pueden indicar que, aunque se trate de materiales con desoxidación total o doble, aún quedan grupos SiOH en la superficie. Para una separación de la línea base, estos grupos SiOH libres son necesarios para algunos compuestos. Además, aunque para la mayoría de las aplicaciones los materiales con desoxidación son mejores, existen casos en los que los materiales sin desoxidación son más eficaces. Por ejemplo, al separar el ácido tartárico del ácido quínico en zumo de fruta, se puede separar isocráticamente hasta la línea base utilizando una columna C-18 sin desoxidación, pero pocas columnas con desoxidación son adecuadas para ello.
¿Cuáles son los beneficios del Endcapping?
• La interacción no deseada de analitos polares o cargados (ácidos, bases, etc.) se reduce porque se minimiza la cantidad de grupos silanol disponibles.
• Los materiales con extremos tapados tienen una mayor carga de carbono en la superficie.
• Se puede minimizar la cola de pico, lo que da como resultado una mejor forma de pico.
• Las interacciones de silanol minimizadas en la columna con doble protección reducen la retención.
• Cuando se utiliza en condiciones adversas (por ejemplo, pH extremo), el recubrimiento de los extremos ayuda a evitar que la superficie de la sílice funcionalizada sea atacada e hidrolizada.
¿Cuándo elegir columnas con o sin remates en los extremos?
Para prolongar la vida útil de la columna, asegúrese de que el pH del método esté dentro del rango de pH recomendado por la fase unida.
En general, las columnas HPLC con desactivación terminal son una buena opción para métodos de pH medio. A medida que aumenta el pH, la disolución de sílice disminuye debido a la desactivación terminal.
Las columnas HPLC sin protección terminal son una buena opción para métodos de pH bajo.